دستگاه ریل تایم

خرید دستگاه ریل تایم Real Time PCR از برند BIORAD

وجه افتراق Real Time PCR با نوع معمولی PCR به کار گرفتن یک نشانگر فلورسنت در واکنش جهت ردیابی محصول واکنش می باشد. این گزارش‌گرها به گونه‌ ای طراحی می‌ شوند که در صورت تکثیر DNA نور تولید کنند. بهترین دستگاه های RealTime PCR و خرید دستگاه ریل تایم PCR از شرکت مهام آزما

لذا افزایش شدت نور ثبت شده در دستگاه با میزان محصول بدست آمده نسبت مستقیم دارد.

به اولین چرخه‌ ای که شدت فلورسنت بیشتر از خط پایه (Threshold) باشد چرخه آستانه یا CT گویند. عدد CT با مقدار الگوی اولیه رابطه معناداری دارد و از روی آن می‌ توان مقدار mRNA اولیه را تخمین زد.

به عبارت دیگر در فاز اولیه مرحله تصاعدی مقدار فلورسنت افزایش می یابد تا به آستانه ای می رسد که به مقدار مشخصی از سطح Background بالاتر است، این چرخه (سیکلی از PCR که قطعه تکثیر از حد آستانه عبور می کند) به عنوان CT شناخته می شود.

خرید دستگاه Real Time PCR مدل StepOne & StepOnePlus از کمپانی ABI

روش Real time PCR می تواند به دو صورت One step (همزمان در یک واکنش ساخت cDNA از RNA و تکثیر آن صورت می گیرد) و Two step (ابتدا ساخت cDNA و در واکنش دیگر تکثیر آن) انجام می شود.

به طور کلی Real time PCR چند مرحله دارد که عبارت است از:

۱- Baseline rgion

در این مرحله هیپ گونه نوری قابل رویت نیست.

۲- Exponential phase

محصول دو رشته ای در هر چرخه دو برابر می شود و رشد تصاعدی مربوط به واکنش آغاز می شود.

۳- The liner phase

ترکیبات واکنش و کارایی آنها روبه اتمام است.

۴- The plateau phase

ترکیبات واکنش از بین می روند و افزایشی در میزان فلورسنت مشاهده نمی شود.

اصطلاحات موجود در روش و دستگاه Real time PCR

• Standard Curve: منحنی استاندارد جهت آنالیزهای کمی
• CT: به اولین چرخه‌ ای که شدت فلورسنت بیشتر از خط پایه (Threshold) باشد چرخه آستانه یا CT گویند.
• Baseline: خط زمینه، جایی که هیپ گونه نور فلورسنتی قابل ثبت نیست.
• Amplification plot: نموداری که در آن تعداد چرخه ها در مقابل شدت فلورسنت رسم می شود.